Hilbijartina kultura rast ji bo dabînkirina mezinbûna hucreya çêtirîn û encamên ceribandinê pir girîng e. Dema ku keştiyên çanda hucreyê hilbijêrin, girîng e ku hûn faktorên wekî celebê hucreyê, armanca taybetî ya çanda we, pîvana çandê, celebê navgîniya çandê, materyal û mezinahiya keştiyan, dermankirinên rûkal, lîpa ji bo rast bihesibînin. danûstendina gazê, û lihevhatina wan bi alavên laboratûara we re.
Li vir faktorên sereke hene ku meriv dema hilbijartina keştiya çanda hucreya rast hildibijêre
1. Li gorî celebê şaneyan, keştiya çanda şaneyê hilbijêrin
Hucreyên Adherent
Pêdiviya van şaneyan rûyek heye ku pê ve girêbidin û belav bibin. Ji bo hucreyên pêgirtî, hûn ê hewceyê keştiyên bi rûberek ku cîhê têr ji bo girêdan û mezinbûna hucreyê peyda dike hewce bike.
Nimûne fîşekên ku bi çanda tevnvîsê hatine dermankirin, sêlên petri, û lewheyên pir-kalî.
Hucreyên Suspension
Van şaneyên hanê di navgînê de herikîn mezin dibin, ji ber vê yekê rûyek nayê hesibandin.
2. Keştiya çanda şaneyê li gorî mezinahiyê hilbijêrin (Kapasiya volumê)
Çandên Piçûk
Ji bo ceribandinên piçûktir an venêrana berbi bilind, keştiyên piçûk îdeal in.
Nimûne lewheyên pir-kanî (6, 24, 96-pelên çanda şaneyan),
xwarinên Petri, an firaxên T25.
Çandên Mezin
Heke hûn hewce ne ku mîqdarên mezin ên hucreyan mezin bikin, keştiyên mezin an bioreaktor çêtir in.
Nimûne flaskên çanda şaneya T75 û T175, bioreaktor, an fîşekên spinner ên ji bo çandên şaneyên suspension.
3. Li ser bingeha dermankirina rûkalê keştiya çanda şaneyê hilbijêrin
Tissue Culture-Treated Surfaces
Keştiyên berê têne derman kirin da ku girêdana hucreyê pêşve bibin, û wan ji bo celebên hucreyên pêgirtî re maqûl dike. Vana bi gelemperî bi maddeyên mîna kolajen, fibronectin, an pêkhateyên din ên matrixê derveyî hucreyê ve têne dorpêç kirin.
Rûberên Ne-Tedawîkirin
Ji bo çandên suspensionê an jî dema ku hucre ne hewce ne ku xwe li ser rûyê erdê bigirin îdeal e. Ew bi gelemperî ji bo hucreyên ku di navgîniyê de bi serbestî mezin dibin têne bikar anîn.
4. Li ser bingeha materyalê keştiya çanda şaneyê hilbijêrin
Polystyrene bi gelemperî ji bo sepanên çanda hucreya standard tê bikar anîn. Ew eşkere ye, ku destûrê dide vekolîna dîtbarî ya hêsan, û hem ji bo hucreyên pêgirtî û hem jî ji bo sekinandinê baş dixebite.
Polycarbonate an Polypropylene ji bo hin serîlêdanên bioreaktorê û ji bo keştiyên ku bêtir nermbûn an dermankirinên rûyê taybetî hewce ne têne bikar anîn.
Cama ku ji bo çanda tevnvîsê ya standard ji ber lêçûn û şikestinê tê bikar anîn, dibe ku keştiyên cam ji bo serîlêdanên taybetî an çandên mezin guncan bin.
Flasks
Ji bo çanda hucreya gelemperî, T-flasks (T25, T75, T150) bi gelemperî têne bikar anîn. Rûyê rûvî ji bo girêdan û mezinbûna hucreyê deverek baş peyda dike. Ger şert û mercên guncan werin domandin ew dikarin hem ji bo hucreyên pêgirtî û hem jî ji bo çandên suspensionê werin bikar anîn.
Petri Dishes
Ji bo çandên piçûk û ji bo ceribandinên ku hewceyê çavdêriyê ne, wekî ceribandinên damezrandina kolonî.
Plateyên Multi-Well
Vana ji bo vekolîna berbi bilind û ceribandinên piçûktir bikêr in. Plateyên bi 6, 12, 24, 48,
96, an jî 384 bîr hene, û ji bo ceribandinên bingehîn ên hucreyê, berdana cytokine, ceribandina narkotîkê, û serîlêdanên din ên berbelav îdeal in.
Spinner Flasks
Ji bo çandên hucreyê yên sekinandinê, nemaze di cildên mezintir de tê bikar anîn ku ji bo domandina mezinbûna hucreyê û ji berhevbûna hucreyê dûr ketina şaneyê ajîtasyona kontrolkirî pêwîst e.
Bioreaktorên
Ji bo çanda suspensionê ya mezin, bioreaktor rê dide kontrola tevlihevtir a li ser şert û mercên hawîrdorê (mînak, pH, germahî, oksîjenasyon) û ji bo hilberîna cildê mezin, wek mînak di hilberîna biyolojîk de têne bikar anîn.
6. Keştiya çanda şaneyê li ser bingeha sterilî û hewayê hilbijêrin
Sterility
Piştrast bikin ku keştî sterîl e an jî hatiye sterilîzekirin da ku ji qirêjbûnê dûr nekevin. Piraniya keştiyên çandî yên bazirganî pêş-sterilîzekirî ne, lê her gav pakêtê kontrol bikin.
Perwanekirin
Hin keştiyên, mîna fîşekan, bi kaps an fîlteran têne veguheztin da ku rê bidin danûstendina hewayê dema ku pêşî li gemariyê digirin. Dema ku hucreyên di şert û mercên dendika bilind de têne çandin ev pêdivî ye.
7. Li gorî rehetiya karanînê keştiya çanda şaneyê hilbijêrin
Autoclavable vs
Hin keştiyên çandê dikarin ji bo ji nû ve bikar bînin otoklav kirin (mînak, şûşeyên cam, hin fîşekên plastîk), hinên din yekcar têne bikar anîn û yekcar in (mînak, sêlên petrî yên plastîk, lewheyên pir-kanî).
Handling û Transport
Hêsaniya veguheztina hucreyan di navbera keştiyan de bifikirin. Mînakî, dibe ku lewheyên pir-kanî hewceyê lewheyên pispor bin ji bo karanîna hêsan a bi alavên wekî pipettorên otomatîkî.
8. Li ser bingeha qebareya navgîniya çandê keştiya çanda şaneyê hilbijêrin
Keştiyek hilbijêrin ku karibe qebareya xwestî ya navgîniya çandê bêyî windakirina çavkaniyan bicîh bîne. Ger bi çandek volga bilind re bixebitin, dibe ku fîşekên mezin an bioreaktorên mezintir hewce bibin, dema ku cildên piçûktir ji bo firaq an lewheyên çanda hucreyê guncan in.
9. Li ser bingeha lêçûnên lêçûnên keştiya çanda şaneyê hilbijêrin
Vexwarin vs
Keştiyên plastîk ên yekcar lêçûn in û xetera gemariyê kêm dikin, lê ew dikarin ji bo operasyonên mezin biha bibin. Keştiyên camê yên ku ji nû ve têne bikar anîn xwedan lêçûnek pêşîn e lê dikare gelek caran were sterilîzekirin û ji nû ve were bikar anîn, ku wan ji bo karanîna dirêj-aborîtir dike.
Volume Efficiency
Piştrast bikin ku mezinahiya keştiyê guncan e da ku ji windakirina materyalan dûr nekevin, nemaze dema ku medyaya mezinbûnê an reagentên biha bikar tînin.
10. Li ser bingeha pêdiviyên serîlêdanê yên taybetî, keştiya çanda şaneyê hilbijêrin
Imaging
Heke hûn hewce ne ku hucreyan di bin mîkroskopê de xuyang bikin, ji bo sazkirina wênekêşana xwe keştiyên bi materyalên zelal ên optîkî û pîvanên guncav hilbijêrin (mînak, lewheyên pir-kalî ji bo dîmendera naveroka bilind an firaxên binê camê ji bo wênekirina hucreya zindî).
Ajîtasyona Kontrolkirî
Ji bo çandên hucreyên suspensionê, flaskên spinner an bioreaktorên ku ajîtasyonek kontrolkirî peyda dikin da ku hucreyan bi rengek wekhev rawestînin bifikirin.
Xelasî
Hilbijartina keştiya çanda hucreyê ya rast hewceyê hevsengkirina çend faktoran dike, di nav de celebê hucreyê, pîvana çandê, lihevhatina materyalê, û hewcedariyên ceribandinê yên taybetî. Dê hucreyên pêgirtî hewceyê rûberên ku pêvedanê pêşvedibin hewce bike, dema ku şaneyên suspensionê ji cild û ajîtasyonê mezintir sûd werdigirin. Ji bo xebata piçûk, dibe ku lewheyên pir-kal an T-flaskên bes be, dema ku çandên mezin dibe ku pêdivî bi flaskên spinner an bioreaktoran hebe. Her gav pê ewle bin ku keştî daxwazên weya sterilbûn û hilgirtinê pêk tînin, û li gorî karanîna we lêçûn-bandoriyê bifikirin.
Bi berçavgirtina van faktoran, hûn dikarin keştiya çêtirîn ku ji bo çanda hucreyê û armancên ceribandina we şert û mercên rast peyda dike hilbijêrin.